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Jun 03, 2023

Le rôle des espèces de bousiers dans l'émission d'oxyde nitreux, la volatilisation de l'ammoniac et le cycle des nutriments

Rapports scientifiques volume 13, Numéro d'article : 3572 (2023) Citer cet article

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Cette étude a évalué le rôle des espèces de bousiers seules ou associées sous différentes espèces sur l'émission de protoxyde d'azote (N2O), la volatilisation de l'ammoniac et les performances du mil chandelle [Pennisetum glaucum (L.)]. Il y avait sept traitements, dont deux témoins (sol et sol + bouse sans coléoptères), une seule espèce d'Onthophagus taurus [Shreber, 1759] (1), Digitonthophagus gazella [Fabricius, 1787] (2), ou Phanaeus vindex [MacLeay, 1819] (3) ; et leurs assemblages (1 + 2 et 1 + 2 + 3). Les émissions d'oxyde nitreux ont été estimées pendant 24 jours, lorsque le millet perlé a été planté en séquence pour évaluer la croissance, le rendement en azote (NY) et l'activité des bousiers. Les espèces de bousiers ont présenté un plus grand flux de N2O dans les excréments le 6ème jour (80 g N2O-N ha−1 jour−1) par rapport au sol et aux excréments (2,6 g N2O-N ha−1 jour−1). Les émissions d'ammoniac variaient avec la présence de bousiers (P < 0,05) et D. gazella avait moins de NH3−N les jours 1, 6 et 12 avec des moyennes de 2061, 1526 et 1048 g ha−1 jour−1, respectivement. La teneur en N du sol a augmenté avec l'application de fumier + coléoptère. L'application de fumier a affecté l'accumulation d'herbage de mil chandelle (HA) indépendamment de la présence de bousiers, et les moyennes variaient de 5 à 8 g MS bucket−1. Une analyse PCA a été appliquée pour analyser la variation et la corrélation à chaque variable, mais elle a indiqué une faible explication de la composante principale (moins de 80 %), insuffisante pour expliquer la variation des résultats. Malgré l'élimination plus importante des excréments, les plus grandes espèces, P. vindex et leur combinaison d'espèces, doivent être davantage étudiées pour mieux comprendre leur contribution aux gaz à effet de serre. La présence de bousiers avant la plantation a amélioré la production de millet perlé en améliorant le cycle de N, bien que les assemblages avec les trois espèces de coléoptères aient augmenté les pertes de N dans l'environnement via la dénitrification.

La production animale peut contribuer à l'intensification de l'effet de serre, la fermentation entérique du bétail1, la bouse fraîche2 et la production de riz3 étant les principaux contributeurs aux émissions de méthane (CH4) ; Les engrais azotés4 et les déjections animales (urine et excréments) sont les principaux contributeurs aux émissions d'oxyde nitreux (N2O). Selon Meng et al.5, les émissions annuelles de gaz à effet de serre (GES) provenant de la production et de l'utilisation d'engrais azotés devraient être de 50 g N2O-N, tandis que la fertilisation avec du fumier de bétail non traité émet 90 g N2O-N.

Les bousiers ont le potentiel de réduire les émissions de GES en aérant le sol et en brisant les zones anaérobies formées sous la croûte de fumier6, ce qui peut affecter l'interaction des excréments déposés avec les populations microbiennes du sol7. Les bousiers sont des insectes coprophages (classe Insecta et ordre Coleoptera) qui jouent un rôle important dans le cycle de l'azote dans les prairies agricoles tempérées et tropicales8. Ils peuvent aider à réduire les émissions de GES et à améliorer la séquestration du carbone en améliorant la croissance de l'herbe et la fertilité du sol9,10,11.

Les taxons de bousiers diffèrent dans leurs techniques de nidification et sont classés comme habitants, tunneliers ou rouleaux12, qui ont un impact majeur sur les fonctions écologiques, telles que l'efficacité d'élimination des excréments13. De nombreuses espèces de coléoptères creusent le sol de manière distincte, avec des diamètres et des tailles variables, ce qui entraîne différents micro-environnements avec différents flux de GES14,15 et un cycle nutritif amélioré en transférant le carbone du sol plus efficacement et en favorisant la diversité bactérienne du sol12,16,17.

Par conséquent, différentes espèces de bousiers ont été appliquées individuellement ou en combinaison avec la bouse utilisée pour fertiliser le millet perlé [Pennisetum glaucum (L.)], où le flux de N2O et la volatilisation de NH3 et la productivité du fourrage ont été évalués. Ainsi, nous avons émis l'hypothèse que la présence de bousiers réduirait les émissions de N2O et la volatilisation de NH3 et augmenterait le rendement des cultures en raison de l'amélioration du cycle de N et de la réduction des pertes de N.

Il y a eu une interaction jour d'échantillonnage × traitement sur les flux de N2O (P < 0,001), avec des émissions moyennes allant de 2 g N2O-N ha-1 jour-1 pour tous les traitements au jour 0 après l'application du traitement et 80 g N2O-N ha-1 jour-1 au jour 6 pour un seau avec juste de la bouse et un seau avec des espèces de fumier + bousier, respectivement (Fig. 1A). Les flux de N2O du seau avec des espèces de bousiers (le groupe de toutes les espèces et P. vindex seul) étaient les plus importants et différaient significativement du seau avec de la bouse et du seau avec juste de la terre au fil du temps (P < 0,001), sauf au jour 2, lorsque le flux de N2O était plus important pour la bouse que pour la bouse + les coléoptères. L'activité des bousiers a augmenté le flux de N2O-N de 71 % et 79 % par rapport au seau avec de la bouse et au seau avec juste de la terre au jour 2, respectivement. L'augmentation s'est produite principalement les jours 1, 2 et 6 (Fig. 1A).

Flux de protoxyde d'azote et volatilisation d'ammoniac du sol, sol + bouse et sol + bouse + bousiers sur une période de 24 jours. (A) Moyenne du flux d'oxyde nitreux de tous les traitements contre les bousiers par rapport à leur contrôle, (B) flux d'oxyde nitreux au fil du temps à partir des excréments de bétail sous des espèces de bousiers contrastées, (C) flux d'ammoniac au fil du temps. T1 : sol uniquement, T2 : sol + bouse, T3 : sol + bouse + O. taurus (OT), T4 : sol + bouse + D. gazella (DG), T5 : sol + bouse + P. vindex (PV), T6 : sol + bouse + OT + DG, T7 : sol + bouse + OT + DG + PV. Astérisque : indique une différence significative au niveau de probabilité de 0,05 entre les traitements au cours du même mois, selon le test de contraste orthogonal.

Les flux de N2O étaient plus importants au cours du temps pour la bouse + les coléoptères que pour le sol et le sol + la bouse (P < 0,001). De plus, O. taurus et D. gazella avaient le moins d'émissions de N2O par rapport aux autres espèces de coléoptères au fil du temps (Fig. 1B). Le flux de N2O du seau contenant de la bouse (T2) a augmenté au fil du temps, mais a diminué de 45 à 2,9 g N2O-N ha−1 jour−1 du jour 6 au jour 24. Les T3 et T4 ont démontré une émission moindre de N2O-N parmi les traitements au bousier aux jours 0, 1 et 12, avec une moyenne de −3, 12,3, 25,8 et −1, 17,5, 23,5 g N2 O-N ha−1 jour−1, respectivement. Le traitement 7 présentait le plus grand pic de N2O-N (145,7 g N2O-N ha-1 jour-1) au jour 6, tandis qu'au jour 12, le N2O ne différait pas de T3 et T4 (Fig. 1B). Le seau de traitement 1 avait le moins moyen de flux de N2O (1,09 g N2O-N ha−1 jour−1). Le traitement 5 a montré une augmentation progressive au fil du temps, avec le plus grand pic de N2O-N aux jours 12 et 24.

Il y avait une interaction jour d'échantillonnage × traitement (P < 0,05) sur la volatilisation de l'ammoniac, qui variait de 6431 g NH3-N ha−1 pour T6 au jour 2 à 241 g NH3-N ha−1 au jour 24. Les traitements T3 et T4 présentaient les moyennes les plus faibles avec 1536 et 1575 g de NH3-N ha−1, respectivement, par rapport aux autres traitements (Fig. 1C). Le traitement T4 a présenté moins de volatilisation de NH3-N aux jours 6, 12 et 24 avec des moyennes de 1526, 1048 et 245 g ha−1 par rapport aux autres traitements. Le T5 a montré un pic au jour 6, qui était supérieur (P < 0,001) à T1, T2, T3 et T4. Le T1 présentait le moins d'émission de NH3-N, et il ne variait pas significativement dans le temps (Fig. 1C).

Tous les traitements avec des espèces de bousiers ont donné des plants de mil poire plus grands (P < 0,05) dans les traitements où de la bouse a été appliquée . Les plants de mil cultivés en présence de bousiers avaient une hauteur de 41,8 cm, ce qui était supérieur aux plants de mil cultivés en l'absence de coléoptères (39,9 cm; P = 0,035; Fig. 2). Les résultats de l'élimination des excréments, de la concentration en azote du sol, de la production de fourrage de mil poire, du rendement en azote et des analyses PCA sont présentés dans les figures supplémentaires. S1, S2, S3 et S4 en ligne).

Hauteur du mil chandelle en présence ou en l'absence de bousiers. Astérisque : les moyennes suivies de différentes lettres sont significativement différentes entre les traitements, selon les contrastes polynomiaux.

L'efficacité d'élimination des excréments par les coléoptères est illustrée à la Fig. 3. Les plus petites espèces, O. taurus et D. gazella, avaient les proportions les plus élevées d'excréments à la surface du seau (T3 = 56 % et T4 = 62 %, respectivement), tandis que la plus grande espèce, P. vindex, avait la plus petite surface occupée par les excréments (T5 = 44 %). De plus, les combinaisons d'espèces 1 + 2 et 1 + 2 + 3 occupaient une plus petite surface des seaux avec de la bouse (T6 = 34 % et T7 = 42 %, respectivement). Cela indique l'efficacité des bousiers dans l'élimination des excréments, avec une proportion plus faible de fumier à la surface du seau et une proportion plus élevée de fumier enfoui dans le sol.

Enlèvement des excréments d'une seule espèce de bousier et de leurs combinaisons. T1 : sol uniquement, T2 : sol + bouse, T3 : sol + bouse + O. taurus (OT), T4 : sol + bouse + D. gazella (DG), T5 : sol + bouse + P. vindex (PV), T6 : sol + bouse + OT + DG, T7 : sol + bouse + OT + DG + PV.

Des recherches antérieures ont montré que l'activité des bousiers augmentait les émissions de N2O provenant de la bouse de vache déposée dans les régions tropicales avec les flux les plus importants les jours 15, 20 et 30, après l'application de fumier17, qui ont également été suggérés pour augmenter les niveaux de NO3− en aérant le substrat18. Néanmoins, la dynamique du N2O pendant la dénitrification peut également être liée à la profondeur du sol, au carbone organique labile, au nitrate du sol et à la biomasse microbienne C19. Une autre possibilité d'augmentation des émissions de N2O est que le bousier a fait des boules avec la bouse de vache, la maintenant à une humidité élevée et favorisant une condition anaérobie, une plus grande concentration de N et plus de carbone disponible. Ce sont des conditions parfaites pour que l'émission de N2O se produise, offrant des conditions optimales pour les bactéries dénitrifiantes20.

L'émission de NH3-N dépend du pH, de l'humidité, de la texture, de la capacité d'échange cationique (CEC) et de la température du sol, ainsi que de la vitesse du vent et de la température de l'air21. Dans l'étude actuelle, N2O-N et NH3-N ont montré les plus grands pics en présence de bousiers. La température et l'humidité du sol étaient en moyenne de 27 °C et 37 % dans les seaux de sol uniquement, et de 26 °C et 78 % dans les seaux avec bousier + coléoptères, respectivement. Cette réduction des émissions de NH3 s'explique par la formation d'une croûte superficielle sur la bouse. Cette croûte peut agir comme une barrière physique au vent, empêchant la volatilisation du NH322. De plus, le NH3 a tendance à diffuser entre les matières fécales, dans lesquelles il sera converti en NH4+, rendant l'émission de NH3 encore plus difficile23.

La diversité des bousiers varie au cours des saisons, et leurs activités et effets liés à la décomposition des excréments sont susceptibles de différer selon les espèces24. Ce fait a probablement un impact non seulement sur la décomposition des excréments, mais aussi sur les émissions de N2O25 et la volatilisation de NH3. Dans cette étude, P. vindex a augmenté les pertes de N même lorsqu'il est mélangé avec d'autres espèces. C'est probablement parce que P. vindex a une durée de vie plus longue (peut vivre plus d'un an) que les autres espèces26. De plus, P. vindex présente dans son intestin 24% de bactéries appartenant à Enterecoccace amilyliy (Scheleifer et Kilpper-Bälz, 1984)27, qui pourraient contribuer au processus de dénitrification comme Enterococcus casseliflavus (Collins, 1984)28. Evans et al.29 ont démontré que le bousier affectait le flux de N2O à la fin de l'été en modifiant les processus de transport de gaz dépendant de l'humidité. La réduction des émissions de N2O de tous les traitements avec du fumier dans l'étude actuelle au cours du premier jour de l'évaluation pourrait être due au fait que le N organique doit passer par plusieurs processus avant de retourner dans l'atmosphère sous forme de N2O30.

D. gazella se caractérise par sa grande capacité de dispersion31,32 et sa large tolérance aux conditions climatiques33, étant un compétiteur et un envahisseur efficace, et réduisant la population d'autres espèces de coléoptères dans un assemblage spécifique34. D'autre part, les petits bousiers enlèvent plus de fumier, en raison de pattes et de têtes plus courtes qui aident à enterrer et à faire des trous35,36. Cela pourrait expliquer pourquoi D. gazella se combinant avec O. taurus de cette étude a enlevé plus de fumier que les autres espèces simples. De plus, lorsque D. gazella était regroupée avec P. vindex, l'élimination des excréments était réduite, mais toujours plus efficace que seule (espèce unique).

Plus de 85 % de l'azote consommé par le bétail retourne au sol via les excréta37. L'activité des bousiers pourrait enfouir et minéraliser le N fécal en peu de temps, transformant le N et le P organiques en une forme inorganique disponible pour la plante38. Cela pourrait avoir augmenté la concentration de N dans le sol (voir Fig. S2 supplémentaire), entraînant une augmentation des émissions de N2O car plus de N est disponible comme substrat pour les bactéries dénitrifiantes. Bien que plusieurs études aient montré que les bousiers augmentaient les émissions de N2O6,14,35, d'autres ont montré leur rôle important dans le cycle des éléments nutritifs du sol, augmentant la matière organique du sol de 159 g sur 600 m2 (équivalent à 2647 kg ha−1)18. Bien que nous n'ayons pas mesuré la teneur en matière organique, les images de chaque seau ont démontré que les bousiers enlevaient et enfouissaient les excréments de la surface du sol. Cela pourrait favoriser l'action de la respiration microbienne du sol et affecter le taux de décomposition de la matière organique du sol39.

La bouse contient de l'azote et d'autres nutriments nécessaires au développement des plantes, ce qui peut améliorer le tallage et augmenter la masse fourragère40,41. Cependant, dans l'étude actuelle, la plus faible accumulation d'herbage lors de la deuxième récolte pour tous les traitements pourrait être due à la faible disponibilité des éléments nutritifs du sol puisque la première récolte a extrait la majeure partie de l'azote restant incorporé par la décomposition des excréments.

Nos résultats suggèrent que l'activité des bousiers de cette étude peut accélérer la minéralisation de l'azote à partir du fumier appliqué. Selon Badenhorst et al.42, la concentration de nutriments dans la végétation augmente de manière significative là où les bousiers étaient actifs. Dans cette étude, l'activité des bousiers n'a affecté la concentration en N du mil chandelle pour aucun des traitements. L'accumulation d'herbe végétale a une forte corrélation avec la hauteur de la plante en raison de la croissance au niveau du méristème, qui est associée à la production de nouvelles cellules et à l'initiation de nouveaux organes43. Cela corrobore nos résultats en raison de la corrélation positive entre la biomasse du mil poire et sa hauteur. De plus, l'ACP vient de révéler le fort effet des bousiers sur l'azote du sol et les gaz à effet de serre, grâce à une corrélation positive entre eux (voir Fig. S4 supplémentaire en ligne).

La présence de bousiers dans les excréments de bovins a fourni d'importants services écosystémiques en améliorant le cycle des nutriments et en augmentant la rétention de l'azote du sol. Une plus grande quantité de N dans le sol a entraîné une plus grande biomasse végétale et une plus grande concentration de N. Les bousiers, cependant, ont rendu certains mauvais services en raison de l'augmentation des pertes d'azote provenant des excréments de bétail au lieu de les réduire. D. gazella a eu tendance à réduire les pertes totales de N sous forme de N2O et NH3 provenant des excréments et a été plus efficace dans l'élimination des excréments de la surface du sol du seau lorsqu'il est combiné avec O. taurus, ce qui améliore le cycle des nutriments dans une prairie.

Toutes les procédures impliquant des animaux ont été menées conformément aux directives et réglementations du Comité institutionnel de protection et d'utilisation des animaux (IACUC) de l'Université de Floride (protocole #201509019). Ce manuscrit est rapporté conformément aux directives ARRIVE.

Cette étude a été réalisée au North Florida Research and Education Center, à Marianna, FL (30°46′35″N 85°14′17″W, 51 masl). L'essai a été réalisé en deux années expérimentales (2019 et 2020) dans une serre.

Le sol utilisé a été collecté à partir d'un pâturage d'arachide à rhizome (Arachis glabrata Benth.) et de bahiagrass d'Argentine (Paspalum notatum Flügge) comme fourrages principaux. Sans matériel végétal et racinaire, seul le sol a été placé dans des seaux, comme décrit ci-dessous dans la section sur l'assemblage des seaux. Le sol a été classé comme sable loameux d'Orangeburg (fine-loameux-kaolinitique, thermic Typic Kandiudults), avec un pH de l'eau de 6,7, des concentrations de P, K, Mg et Ca extratables au Mehlich-1 de 41, 59, 63, 368 mg kg-1, respectivement. La moyenne des températures et de l'humidité relative quotidiennes minimales et maximales dans la serre pour septembre et novembre (septembre pour l'essai sur les coléoptères en raison de l'apparition saisonnière des coléoptères, et octobre et novembre pour l'essai sur le millet poire) en 2019 et 2020 était de 11 et 33 °C, 81 % ; 10 et 35 °C, 77 %, respectivement.

Pour sélectionner les espèces de coléoptères, un échantillonnage préalable de bousiers a été effectué dans l'expérience de pâturage dans la même zone (mélange fourrager d'herbes et de légumineuses) pour déterminer le nombre d'espèces de bousiers selon les groupes fonctionnels comme décrit par Conover et al.44. Les coléoptères ont été pré-échantillonnés de mars 2017 à juin 2018, où le groupe Tunnelers était dominant et représenté par Onthophagus taurus (Schreber), Digitonthophagus gazella (Fabricius), Phanaeus vindex (MacLeay), Onthophagus oklahomensis (Brown) et Euniticellus intermedius (Reiche). D'autres espèces étaient présentes mais pas abondantes, notamment Aphodius psudolividus (Linnaeus), Aphodius carolinus (Linnaeus) et Canthon pilularius (Linnaeus) identifiés respectivement comme groupes Dweller et Roller. Le pré-échantillonnage a indiqué que trois espèces du groupe Tunneler étaient plus abondantes et ont donc été choisies pour composer les traitements expérimentaux (Fig. 4).

Espèce de bousier la plus abondante à Marianna, en Floride, utilisée dans la présente étude. Crédits : Carlos CV García.

Trois espèces de bousiers communaux communs ont été utilisées : O. taurus (1), D. gazella (2) et P. vindex (3). Les traitements comprenaient deux traitements contenant uniquement de la terre et de la terre + excréments sans coléoptères ont été considérés comme Contrôle 1 (T1) et Contrôle 2 (T2), respectivement. Espèces isolées T3 = 1, T4 = 2, T5 = 3 et leurs combinaisons T6 = 1 + 2 et T7 = 1 + 2 + 3. Les bousiers ont été piégés dans le pâturage avec des animaux au pâturage en utilisant les pièges à fosse standard appâtés à la bouse de bétail, comme décrit par Bertone et al.41. Pour éviter de perdre des échantillons en raison du piétinement du bétail, 18 pièges ont été randomisés dans neuf enclos (deux pièges par enclos) et installés protégés par des cages métalliques, et après une période de 24 heures, les coléoptères ont été collectés et les pièges retirés. Le tableau 1 montre le nombre de bousiers, leur masse totale (utilisée pour standardiser les traitements) par traitement, et la masse moyenne par espèce. Pour maintenir l'uniformité entre les traitements, nous avons maintenu la biomasse de coléoptères constante entre les espèces à environ 1,7 à 1,8 g par assemblage (tableau 1). Vingt-quatre heures après avoir récupéré les coléoptères des pièges de terrain, ils ont été séparés à l'aide d'une cage d'élevage d'insectes, classés, puis stockés dans de petites bouteilles en verre munies d'un bouchon et reliées à un grillage pour maintenir la ventilation et maintenir les coléoptères en vie.

La terre utilisée dans les seaux a été collectée lors de l'essai de pâturage au cours de deux années expérimentales (août 2019 et août 2020) dans neuf enclos (0,9 ha chacun). Les 21 seaux en plastique avaient un diamètre de 23 cm et 30 cm (0,034 m2) et recevaient chacun 10 kg de terre (Fig. 5). Au fond du récipient, sept trous ont été pratiqués pour l'évacuation de l'eau à l'aide d'un treillis métallique de 1 mm de diamètre au-dessus de la surface des trous pour empêcher les bousiers de s'échapper. De l'eau a été ajoutée tous les quatre jours pour maintenir les conditions naturelles du sol à 60 % de la capacité au champ du sol (c.-à-d. un seau) (mesurée avec le poids du sol et la capacité de rétention d'eau du sol). Parce que le sol des trois paddocks avait une texture légèrement différente (argile sablo-argileuse et loam argilo-sableux), nous les avons utilisés comme facteur de blocage.

Détails du seau en plastique du seau pour l'essai du bousier.

La quantité de fumier frais utilisée dans l'essai a été déterminée sur la base de la surface moyenne couverte par le fumier et le poids du fumier (0,05 à 0,09 m2 et 1,5 à 2,7 kg) du bétail dans les systèmes de pâturage, comme suggéré par Carpinelli et al.45. De la bouse fraîche a été collectée sur des bouvillons Angus broutant des pâturages d'herbe de saison chaude (herbe de Bahia) et conservée au réfrigérateur pendant 24 h, avant le début de l'expérience. Un total de 16,2 kg de fumier frais a été collecté, dont 0,9 kg ont été utilisés dans chaque seau. Après l'épandage de fumier, des bousiers ont été ajoutés au seau. Pour éviter que les bousiers ne s'échappent, un filet en plastique mobile de 0,5 mm de diamètre a été placé recouvrant les seaux avant et après chaque évaluation. L'expérience a duré 24 jours au cours de chaque année expérimentale (2019 et 2020), avec une température moyenne de 28 ° C et une humidité relative de 79%, a acquis des informations du Florida Automated Weather Network (FAWN).

Les flux gazeux issus des traitements ont été évalués par la technique de la chambre statique46. Les chambres étaient circulaires, avec un rayon de 10,5 cm (0,034 m2). Les bases et les couvercles des chambres étaient en chlorure de polyvinyle (PVC) et le couvercle était recouvert d'une feuille acrylique pour éviter toute réaction des gaz d'intérêt avec le matériau de la chambre (Fig. 6). Les couvercles des chambres étaient recouverts d'un ruban réfléchissant pour assurer l'isolation et équipés d'un septum en caoutchouc pour l'échantillonnage47. Le couvercle était équipé d'un tube de ventilation en cuivre de 6 mm de diamètre et de 10 cm de long pour assurer une pression d'air adéquate à l'intérieur de la chambre pendant les mesures, compte tenu d'une vitesse moyenne du vent de 1,7 ms-148,49. Pendant les mesures, les couvercles et les bases des chambres ont été maintenus scellés en ajustant étroitement les chambres à air des pneus de vélo sur la zone séparant le couvercle et la base. Les bases des chambres ont été installées au-dessus des seaux à une profondeur de 8 cm, avec 5 cm s'étendant au-dessus du niveau du sol. Les bases ont été retirées le dernier jour d'évaluation (le 24) de chaque année expérimentale.

Détails et instruments de la chambre statique pour la collecte des GES dans l'essai sur les bousiers.

Les flux de gaz ont été mesurés à 1000 h suivant les recommandations d'échantillonnage de Parkin & Venterea50, à sept reprises du 28 août au 22 septembre au cours des deux années (2019 et 2020), soit les jours 0, 1, 2, 3, 6, 12 et 24 après l'application des excréments. Pour chaque chambre, des échantillons de gaz ont été prélevés à l'aide d'une seringue de 60 ml à des intervalles de 15 minutes (t0, t15 et t30). Le gaz a été immédiatement purgé dans des flacons en verre pré-évacués de 30 ml équipés d'un bouchon en caoutchouc butyle scellé avec un septum en aluminium (cette procédure a été effectuée deux fois par flacon et par temps de collecte). Le temps zéro (t0) représentait le gaz collecté hors des godets (avant la fermeture de la chambre). Immédiatement après, le couvercle du seau a été hermétiquement fermé en ajustant le couvercle à la base avec la chambre à air de la bicyclette, suivi des temps de déploiement de l'échantillon suivant.

Des analyses d'échantillons de gaz ont été effectuées à l'aide d'un chromatographe en phase gazeuse (Chromatographie en phase gazeuse Trace 1310, Thermo Scientific, Waltham, MA). Pour le N2O, un détecteur de capture d'électrons (350 °C) et une colonne capillaire (colonne garnie J&W GC dans un tube en acier inoxydable, longueur 2 m (6,56 pieds), diamètre extérieur de 1/8 po, ID de 2 mm, garnissage Hayesep D, taille de maille 80/100, préconditionné, Agilent Technologies) ont été utilisés. La température de l'injecteur et des colonnes était de 80 et 200 °C, respectivement. Le flux quotidien de N2O-N (g ha−1 jour−1) a été calculé comme décrit dans l'Eq. (1):

où F est le flux de N2O (g ha−1 jour−1), A est la surface de la chambre, et dC/dt est le changement de concentration dans le temps calculé à l'aide d'une méthode d'intégration linéaire par Venterea et al.49.

La volatilisation de l'ammoniac a été mesurée en utilisant la technique de la chambre ouverte, comme décrit par Araújo et al.51. La chambre à ammoniac était constituée d'une bouteille de polyéthylène téréphtalate (PET) d'un volume de 2 litres. Le fond de la bouteille a été retiré et utilisé comme bouchon au-dessus de l'ouverture supérieure pour garder l'environnement contrôlé, exempt d'insectes et d'autres sources de contamination. Un fil de fer a été utilisé pour soutenir le pot en plastique. Une bande de polyfoam (250 mm de long, 25 mm de large et 3 mm d'épaisseur) a été trempée dans 20 ml de solution acide (H2SO4 1 mol dm-3 + glycérine 2 % v/v) et fixée sur le dessus, l'extrémité inférieure de la mousse restant à l'intérieur du pot en plastique. À l'intérieur de chaque chambre, il y avait un fil de 250 mm de long conçu avec un crochet pour le soutenir depuis le haut de la bouteille et un panier métallique à l'extrémité inférieure pour supporter un bocal en plastique (25 ml) contenant la solution acide pour garder la bande de mousse humide pendant les périodes d'échantillonnage (Fig. 7). Les chambres à ammoniac ont été placées installées dans le seau situé au milieu de chaque bloc expérimental après le dernier prélèvement de gaz de la journée et retirées avant le début du prélèvement de gaz suivant.

Détails de la chambre d'ammoniac mobile pour la mesure de l'ammoniac dans le cadre d'un essai sur les bousiers. Adapté de Araújo et al.51.

Des photographies du sol et de la portion d'excréments de chaque seau ont été prises vingt-quatre heures après le dernier jour d'échantillonnage de mesure du flux de gaz pour déterminer l'élimination des excréments d'une seule espèce de coléoptère et de leur combinaison. Dans la section sur l'analyse statistique, la programmation et les procédures statistiques sont décrites. Après cette procédure, des graines de millet perlé ont été plantées dans chaque seau. Après 5 jours de germination des graines, les plantes ont été éclaircies, en maintenant quatre plantes par seau. De plus, les plantes ont été coupées deux fois dans un intervalle de cinq semaines, la première coupe ayant eu lieu le 23 octobre et la deuxième le 24 novembre, au cours des deux années expérimentales. Avant chaque récolte, la hauteur des plantes a été mesurée deux fois au cours de la dernière semaine. Le jour de la récolte, toutes les plantes ont été coupées à 10 cm au-dessus du niveau du sol. Les échantillons ont été séchés à 55 ° C dans un four à air pulsé jusqu'à poids constant et broyés à billes à l'aide d'un Mixer Mill MM 400 (Retsch, Newton, PA, USA) pendant 9 min à 25 Hz, et analysés pour la concentration totale de N à l'aide d'un analyseur C, H, N et S par la méthode de combustion sèche Dumas (Vario Micro Cube; Elementar, Hanau, Allemagne).

Les traitements ont été distribués selon un schéma en blocs complets randomisés (RCBD), avec trois répétitions. Les données ont été analysées à l'aide de la procédure mixte de SAS (ver. 9.4., SAS Inst., Cary, NC) et LSMEANS comparées à l'aide du PDIFF ajusté par le test t (P <0,05). Le jour d'échantillonnage du gaz et la récolte ont été utilisés comme mesures répétées. Les traitements ont été considérés comme l'effet fixe, tandis que le bloc et l'année expérimentale ont été considérés comme des effets aléatoires. Des contrastes polynomiaux ont été utilisés pour tester l'effet de l'absence de bouse (sol vs sol + bouse), l'effet du bousier (sol + bousier vs sol + bouse + espèce de bousier) et l'effet de chaque espèce et de leurs combinaisons (espèces 1 vs 2, 3, 1 + 2, 1 + 2 + 3) sur l'émission de N2O et le cycle des nutriments. Une analyse en composantes principales (ACP) a été utilisée pour mieux comprendre l'effet des traitements contre les bousiers, en utilisant un graphique biplot avec les fonctions PRCOMP du package stats (R Core Team)52 et un ggbiplot du package ggbiplot53, avec l'aide des packages vegan, tidyverse et devtools54.

Les étapes suivantes ont été suivies pour déterminer les proportions d'intérêt, « sol » et « fumier », après segmentation des images originales pour l'analyse exclusive de la partie correspondant au contenu des seaux : conversion des images colorées en images en niveaux de gris à l'aide du modèle RVB55 ; lissage des transitions aux frontières à l'aide de la défocalisation et de la technique du filtre gaussien multidimensionnel56 ; Le seuillage manuel consiste à analyser l'histogramme des images en niveaux de gris pour générer des images binaires et à déterminer la proportion de "sol" et de "fumier" dans les images binaires en comptant les pixels d'intérêt. Le langage de programmation Python57, ainsi que les bibliothèques imageio58 numpy59 matplotlib60 et scikit-image61, ont été utilisés pour analyser les images et créer les figures résultant du processus.

Les ensembles de données utilisés et/ou analysés au cours de l'étude en cours sont disponibles auprès de l'auteur correspondant sur demande raisonnable.

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Correspondance avec Carlos CV Garcia.

Les auteurs ne déclarent aucun intérêt concurrent.

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Réimpressions et autorisations

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Reçu : 25 septembre 2022

Accepté : 24 février 2023

Publié: 02 mars 2023

DOI : https://doi.org/10.1038/s41598-023-30523-0

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